人磷脂酶B(PLB) elisa試劑盒基于雙抗體夾心法的原理進行測定。其包括固相免疫酶標(biāo)法和顏色反應(yīng)法。試劑盒中已經(jīng)預(yù)包被了特異性抗PLB抗體的微孔板。操作時,待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品與孔板中的抗PLB抗體發(fā)生特異性結(jié)合,在洗滌后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗,形成夾心免疫復(fù)合物。再次洗滌后,加入底物TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯二胺)進行發(fā)色反應(yīng)。酶反應(yīng)停止后,通過比色測定標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品的吸光度,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品中PLB的含量。
1.樣品處理:將待測樣品預(yù)處理,如血清、血漿或細(xì)胞上清。將樣品離心去除沉淀,獲取上清液。
2.樣品稀釋:根據(jù)預(yù)先實驗確定的稀釋倍數(shù),將待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品依次稀釋到不同濃度。
3.加樣:將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入微孔板中,每個樣品設(shè)置重復(fù)孔位。
4.孵育:在室溫下孵育一段時間,使樣品中的PLB與孔板中的抗PLB抗體發(fā)生特異性結(jié)合。
5.洗滌:將孔板倒置,使用洗滌緩沖液洗滌孔位,去除未結(jié)合的物質(zhì)。
6.加標(biāo)記抗體:加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗,與夾心免疫復(fù)合物結(jié)合。
7.洗滌:同樣使用洗滌緩沖液洗滌孔位,去除未結(jié)合的物質(zhì)。
8.底物反應(yīng):加入底物TMB,與酶標(biāo)記的二抗發(fā)生反應(yīng),在光束下形成藍(lán)色溶液。
9.反應(yīng)停止:加入停止液終止底物反應(yīng),使溶液變?yōu)辄S色。
10.測定吸光度:使用ELISA分析儀測定各孔位的吸光度值,一般在450nm波長下進行測定。
人磷脂酶B(PLB) elisa試劑盒應(yīng)用領(lǐng)域:
1.心肌疾病研究:PLB是調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞收縮和舒張的重要蛋白,其異常表達(dá)與心肌疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。ELISA試劑盒可以定量檢測PLB的含量,揭示心肌疾病的發(fā)病機制。
2.藥物篩選:人PLBELISA試劑盒可以用于藥物對PLB的影響研究。通過評估藥物對PLB表達(dá)水平的影響,篩選出對心臟功能有益的藥物。
3.臨床診斷:人PLBELISA試劑盒可以用于臨床上檢測PLB的含量,評估心肌功能和狀況。可作為一種輔助手段,在心血管疾病的早期診斷和治療中提供參考。