ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)技術(shù)基于抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)。在人尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1ELISA試劑盒中,先將特異性抗體包被在微孔板上,然后加入含有URAT1的樣本,URAT1蛋白會(huì)與包被在微孔板上的抗體結(jié)合。通過洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,再加入酶標(biāo)記的二抗來識(shí)別已結(jié)合的URAT1蛋白。最后,加入酶的底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),其強(qiáng)度與URAT1的濃度成正比,通過光譜儀等儀器讀取吸光度值(OD值),實(shí)現(xiàn)對URAT1的定量分析。
人尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1elisa試劑盒的組成:
1.預(yù)涂有抗體的微孔板:96孔或384孔板,已經(jīng)預(yù)先涂覆了針對URAT1的特異性捕獲抗體。
2.樣本稀釋液:用于稀釋血清、血漿或其他體液樣本。
3.標(biāo)準(zhǔn)品:已知濃度的URAT1蛋白,用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,便于計(jì)算樣本中URAT1的濃度。
4.酶標(biāo)記的二抗:能夠特異性結(jié)合URAT1并與之形成復(fù)合物的酶標(biāo)記抗體。
5.底物溶液:酶的底物,添加后會(huì)產(chǎn)生顏色變化,用于信號(hào)檢測。
6.停止液:用于終止酶促反應(yīng),停止顏色發(fā)展。
7.洗滌緩沖液:用于清洗微孔板,去除未結(jié)合的樣本和酶標(biāo)記的二抗。
8.說明書:提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟、數(shù)據(jù)解釋和安全警示等信息。
應(yīng)用:
1.疾病診斷:高尿酸血癥和痛風(fēng)的診斷,URAT1水平的異常升高可能提示這些疾病的存在。
2.研究工具:在藥物研發(fā)中,用于篩選和評估潛在影響URAT1功能的藥物。
3.疾病監(jiān)測:對于正在接受降尿酸治療的患者,監(jiān)測URAT1水平有助于評估治療效果。
人尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1elisa試劑盒的操作步驟:
1.樣本準(zhǔn)備:將待測血清、血漿等生物樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
2.加樣:將稀釋后的樣本以及不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品分別加入到微孔板中,并孵育一定時(shí)間。
3.洗滌:倒掉液體,用洗滌緩沖液清洗微孔板數(shù)次,以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
4.加酶標(biāo)二抗:加入酶標(biāo)記的二抗,再次孵育,使其與已結(jié)合的URAT1蛋白反應(yīng)。
5.再次洗滌:重復(fù)洗滌步驟,確保只保留特異性結(jié)合的抗原-抗體復(fù)合物。
6.顯色:加入底物溶液,經(jīng)過一定時(shí)間的孵育后,產(chǎn)生顏色變化。
7.終止反應(yīng):通過添加停止液來結(jié)束顏色發(fā)展。
8.讀板:使用光譜儀讀取各孔的吸光度值,波長通常為450nm。